王奕超,张卫卫.灿烂弧菌粘附相关因子 VsA 的表达及功能研究[J].海洋通报,2019,(1):70-77
灿烂弧菌粘附相关因子 VsA 的表达及功能研究
The expression and function of adhesion related factor VsA in Vibrio splendidus
投稿时间:2018-07-12  修订日期:2018-09-26
DOI:10.11840/j.issn.1001-6392.2019.01.010
中文关键词:  灿烂弧菌  Zn2+转运系统  粘附因子  Zn2+调控
英文关键词:Vibrio splendidus  Zn2+ transport system  adherence factor  Zn2+ regulation
基金项目:国家自然科学基金 (41676141)
作者单位E-mail
王奕超 宁波大学 海洋学院浙江 宁波 315211 547102125@qq.com 
张卫卫 宁波大学 海洋学院浙江 宁波 315211 zhangweiwei1@nbu.edu.cn 
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中文摘要:
      为了探究灿烂弧菌中 Zn2+转运系统的细胞周质组分 VsA 的表达与功能,本实验采用 PCR 克隆 vsA 基因,实时荧光定量测定 vsA 基因的表达,利用抗体封闭实验研究 VsA 蛋白的功能。生物信息学分析表明 VsA 具有结合和转运 Zn2+的结构基础。实时荧光定量结果表明,vsA 的表达受 Zn2+调控,且具有浓度依赖性,0.01 mmol/L 的 Zn2+可使 vsA 的表达量下调至对照组的0.5倍,而添加等摩尔量的 Cu2+、Fe3+、Mg2+和 Ca2+对 vsA 的表达无明显影响。而 0.1 滋mol/L Zn2+则会诱导 vsA 的表达。此外,在大肠杆菌 Escherichia coli BL21 (DE3) 中进行了 VsA 的重组表达,制备了 VsA 的小鼠多克隆抗体。利用抗体封闭 VsA 蛋白可导致灿烂弧菌在 Zn2+限制条件下的生长受抑制,以及过氧化氢的能力和粘附效率的降低。本研究获得了灿烂弧菌的 vsA 基因,其表达受 Zn2+浓度调控,VsA 蛋白在灿烂弧菌生长、抗氧化以及粘附宿主细胞过程中发挥作用。
英文摘要:
      To explore the expression and function of periplasmic protein VsA of Zn2+ transport system in Vibrio splendidus, vsA was cloned using PCR, and its expression was characterized using real -time RT-PCR, and the function of VsA was determined using antibody blocking test. Bioinformatics analysis showed that VsA has the structural basis for the combination and transportation of Zn2+ depend on the level of Zn2+ . Addition of 0.01 mmol/L Zn2+ reduced its expression to 0.5-fold compared to the control sample. While the same concentration of Cu2+ , Fe3+ , Mg2+ and Ca2+ showed no effect on the expression of vsA. 0.1 滋mol/L Zn2+ can induce the expression of vsA. VsA was also recombined and expressed in Escherichia coli BL21 (DE3) and the antiserum against VsA was obtained using the purified VsA. Using the antibody blocking method may inhibite the growth of V. splendidus under low Zn2 + condition, reduce anti-hydrogen peroxide capacity and adhesion of V. splendidus. In all, vsA gene was cloned in V. splendidus, and its expression was regulated by Zn2 + . VsA is involved in the growth, antioxidant activity, and adhesion activity in V. splendidus.
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